CY3標(biāo)記
CY3標(biāo)記反應(yīng)原理：
Reactive CY3專一的與伯胺反應(yīng)（N-末端及賴氨酸殘基側(cè)鏈）形成穩(wěn)定的酰胺鍵
操作過程：
實驗前準(zhǔn)備：
1. 仔細(xì)閱讀使用說明書。
2. 計算待使用Reactive CY3的量。
3. 提前20 min從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫（注：不需要用到的Reactive CY3繼續(xù)放置冰箱中）。
4. 溶解Reactive CY3：加入20 μL DMF至Reactive CY3瓶中，靜置10 min，待其充分溶解，此時CY3的濃度為10 mM。
操作步驟：（本操作步驟按照1 mg的量進(jìn)行標(biāo)記）
1. 取1 mg待標(biāo)記抗體于Filtration tube中，并加入相應(yīng)體積的 Labeling Buffer至總體積為0.5 mL，12,000× g離心10 min。（注：①Filtration tube的最大體積為0.5 mL。②待標(biāo)記抗體濃度低時，可先超濾離心一次。）
2. 加入13.3 μL Reactive CY3 和適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使抗體的終濃度為2 mg/mL，并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育60 min。
3. 12,000 × g離心10 min。
4. 加入適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使終體積為0.5 mL，并輕輕吹打混勻，12,000×g離心10 min。并重復(fù)操作一次。
5. 加0.2 mL Labeling Buffer至Filtration tube中，輕輕吹打。將濾芯倒轉(zhuǎn)放置于另一個離心管中，6,000×g離心10 min。
6. 收集離心管中的溶液，即為CY3標(biāo)記的抗體。
注意事項：
1. 本試劑盒也可標(biāo)記其它含有氨基（NH2-）的抗原、HRP、多肽，具體標(biāo)記比例根據(jù)待標(biāo)記物中氨基的數(shù)量確定。
2. DMF要密封干燥保存，使用完立即用封口膜封緊。
3. 操作步驟5中，可用Labeling Buffer作為回收標(biāo)記抗體的緩沖液，也可使用其它任何緩沖液或保護(hù)劑。
4. 本試劑盒未開封前的有效期為一年，請在有效期內(nèi)使用。
5. 本試劑盒提供的為10 kDa的Filtration tube，標(biāo)記抗原或多肽請注意分子量的大小。
6. 在步驟2中，標(biāo)記其它抗體時，我們應(yīng)先控制抗體的終濃度為2 mg/mL，然后再根據(jù)抗體的量計算應(yīng)加入Reactive CY3的體積。
7. 要確定在偶聯(lián)中不引入游離氨基（Tris，氨及疊氮鈉均可與活化CY3反應(yīng)，因此會降低蛋白與CY3的偶聯(lián)率）。
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